Catherine Willows (Marg Helgenberger)
Sara Sidle (Jorja Fox)
Gil Grissom chamou Sara para fazer parte da equipe dele na CSI, deixando então seu trabalho em São Francisco no escritório estadual de investigação.
Não tem muita facilidade com relacionamento entre pessoas, mas aos poucos ganha o respeito dos amigos. Sara sempre foi uma excelente estudante, e agora é uma profissional de muito prestígio. Gosta do que faz a ponto de deixar sua vida pessoal de lado por causa de seu trabalho.
Análise de DNA. É um CSI nível 3. Nasceu em 5 de Maio de 1975 e é solteiro. Desde que ganhou seu primeiro kit de química aos sete anos, Greg sabia que queria ser um cientista. Se formou em Química pela Universidade de Berkeley. Integra a equipe que vai a campo oficialmente a partir da quinta temporada
Nick Stokes (George Eads)
Nick é texano, mas mudou-se para Vegas para provar para si mesmo e para os outros que tem condições de sobreviver do seu trabalho na CSI. Para fazer parte do grupo de investigadores, Nick teve que deixar a família em outra cidade. Tem um lado dele que ama seus parentes e tem outro que busca sua independência e sua identidade.
Gil Grissom (William Petersen)
Grissom trabalha desde seus 22 anos na área criminalística. Mesmo quando jovem se interessava pela morte - coletava cadáveres, o que lhe rendeu alguns trabalhos, já que era chamado pelas autoridades locais para ajudar em autópsias de animais. Entrou para o instituto médico legal de L.A quando fez 16 anos, sendo um dos mais jovens especialistas a fazer parte do escritório de investigação. Atualmente a L.A possui um alto grau de importância quando comparado a outros laboratórios criminalistas do país. Depois de 17 anos de trabalho foi promovido como chefe do escritório de criminalística forense em Los Angeles, sendo então responsável pela equipe de investigação do turno da noite.
Amigo pessoal de Grissom, durante as necrópsias e análises, consegue de Gil as frases mais comentadas da série, o único a entendê-lo e vice-versa. Ele perdeu as duas pernas e fica implícito que isso aconteceu num acidente durante a investigação de uma cena de crime.
Warrick Brown (Gary Dourdan)
Capitão Jim Brass (Paul Guilfoyle)